用 BamHI切割一重组 DNA 分子并从中分离纯化了两个 DNA片段,一400bp,另一 900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来,得到如图 1 所示的结果。 于是将这两种片段混合起来,并在连接酶的存在下进行,分别在 30 分钟和 8 小时取样进行凝胶电泳分析,惊讶的是,连接产物并非是理想中的 1.3kb的重组分子,而是一种复杂的片段模式(图 A)。同时发现随着时间的延长,较小片段的浓度逐渐降低,大片段的浓度逐渐增加。如果用 BamHI来切割连接后的混合物,则起始的片段可以重新产生(图 A)。 从凝胶中分离纯化出 1.3kb 的片段,并取出一部分用 BamHI进行切割,以检查它的结构。正如预料的一样,出现了两个原始的带(图 B)。但是用 EcoRI切割另一部分样品,希望能够产生两个 300bp 和一个长度为 700bp 的核苷酸片段,然而,凝胶电泳的结果,惊奇(图 B)。 在原始连接混合物中为什么有如此多的带?