当激素受体与激素结合后就会变成DNA结合蛋白。糖皮质激素的激素受体改变,它可以激活特定的反应基因。遗传学和分子生物学分析表明DNA和激素结合位点占据了糖皮质激素受体C末端一半的确定区域。激素结合可以以下面两种方式的任何一种产生有功能的DNA结合蛋白:①改变受体,产生一个DNA结合结构域;②改变受体,覆盖一个已存在的DNA结合结构域。 通过糖皮质激素受体的一系列末端缺失的活性比较来研究这些可解性(图13-3-46)。对应受体的N末端区的cDNA片段被插入一载体中,使它可以在适当的细胞中得以表达。受体片段激活效应基因的能力检测是通过可与一个携带有糖皮质激素反应并且一个CAT基因的报道共瞬时表达系统转染来进行的(如图13-3-46所示)。在全长受体cDNA共转染的细胞中产生所预期的反应:在缺乏糖皮质激素时,CAT活性没被检测到;在糖皮质激素(地塞米松)存在的情况下CAT活性很容易被检测。六个突变体分别缺失C末端的27、101、123、180、287、331位氨基酸,在地塞米松存在或不存在条件下均不能激活CAT的表达。相反,另外四个突变体缺失了C末端的190、200、239、270位氨基酸,在糖皮质激素存在与否的条件下激活CAT基因的表达。单独实验表明突变受体是等同合成。 这些实验是如何区分两种所设想的由普通受体向能与DNA结合的形式转变的模式?激素的结合产生了一个DNA结合位点,还是覆盖一个已有的DNA结合位点?